熒光定量PCR儀和普通PCR儀檢測區別是什么?
熒光定量PCR儀和普通PCR儀是兩種常用的基因擴增技術,它們在檢測原理、檢測方法、檢測準確性和應用范圍等方面存在顯著差異。所以需要根據不同類型的PCR儀采用不同方法定期檢測校準,才能確保實驗結果的準確性和可靠性。
一、檢測校準區別
普通PCR儀:通過PCR技術將特定的DNA片段在體外進行指數級擴增,擴增過程中不涉及熒光信號的監測,因此只檢測設備的溫度和濃度。
熒光定量PCR儀:在PCR擴增過程中,通過熒光染料或熒光探針標記特異性地檢測目標DNA片段的增加,利用熒光信號的變化實時監測DNA的擴增情況,因此需檢測設備的溫度和濃度、以及熒光部分。
相對來說,熒光部分的檢測難度較大,檢測熒光部分還需要用到特定的標物,所以檢測費用更高。
熒光定量PCR儀在運行過程中,容易出現控溫不準、光路缺陷等問題。我們主要對溫度示值誤差、溫度均勻度、溫度最大過沖量、平均升溫速率、平均降溫速率、Ct值示值誤差、均勻度和精密度、通道峰值高度一致性、線性靈敏系數、熔解溫度漂移、熔解溫度比(光學系統物理項目)、熒光強度精密度、樣本測量精密度、熒光線性相關系數、樣本線性相關系數等指標進行定期檢測。這些檢測決定著基因擴增各個步驟的有效完成,確保試驗結果的準確性。